Исследования

Абстракт

Эффективная криоконсервация небольшого количества сперматозоидов человека имеет важное значение в случаях тяжелого мужского бесплодия, особенно тех, которые требуют хирургического извлечения сперматозоидов.

Хотя витрификация отдельных сперматозоидов на специальных для этого устройствах (SpermVD®️) обеспечивало оптимальное извлечение клеток при размораживании, показатели подвижности, как правило, были ниже, чем при групповом замораживании.

Воздействие криопротектора напрямую влияет на подвижность после размораживания; однако оптимальное время уравновешивания криопротектора неизвестно.

Мы оценили несколько временных интервалов, в течение которых отдельные сперматозоиды подвергались воздействию криопротекторов перед замораживанием, и различные криопротекторы.

Всего 2925 сперматозоидов 20 пациентов в с диагнозами от нормозооспермии до умеренной олиготератоастенозооспермии витрифицировали небольшими группами на 60 SpermVD®️ в каплях 1 мкл смеси криопротектор/промывочная среда, 1:1 об./об.

Каждую группу витрифицировали через 2-60 минут уравновешивания. Подвижность в каждой группе оценивали после размораживания.
Осадок замораживали в криопробирках в смеси криопротектор/промывочная среда, 1:1 об./об., после 10 минут уравновешивания при комнатной температуре и 10 минут в парах жидкого азота.

Подвижность после размораживания ухудшалась по мере увеличения времени воздействия криопротектора.

Самая высокая подвижность после размораживания (32,1%) наблюдалась при 8-минутном уравновешивании.

Через 10 минут подвижность витрифицированных сперматозоидов была ниже, чем у замороженных в группе (31,7% против 37,0%, p <0,0001).

Различные криопротекторы не повлияли на результаты. Поэтому для витрификации небольшого числа сперматозоидов рекомендуется максимальное время уравновешивания 8 минут для достижения максимальной подвижности после размораживания.

Ключевые слова: азооспермия; криоконсервация; витрификация сперматозоидов.

PubMed: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32208003/

Full text: https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/19396368.2020.1737271

Абстракт

Вопрос исследования:
Цели исследования – оценить эффективность нового устройства SpermVD для витрификации нескольких человеческих сперматозоидов и определить, могут ли чашки PICSI и центрифугирование в градиенте плотности улучшить качество сперматозоидов после размораживания.

Дизайн и методы:
Чтобы определить подходящие методы подготовки образцов как из отмытой, так и из нативной спермы провели селекцию сперматозоидов в чашках для ИКСИ и PICSI и замораживали с помощью нового устройства SpermVD. Отобранные сперматозоиды переносили в лунки SpermVD с 1 мкл капли смеси Sperm Freezing Medium/QA Medium с Hepes, 50/50 об./об.. Устройство подвергалось воздействию паров жидкого азота в течение 5 минут, а затем немедленно помещалось в жидкий азот. Сперматозоиды размораживали при 37 °С в чашке со средой QA с Hepes, покрытой маслом, после чего их немедленно исследовали и повторно оценивали. Результаты замораживания сперматозоидов оценивали по прогрессивной подвижности, подвижности, жизнеспособности и выживаемости замороженных-размороженных сперматозоидов.

Полученные результаты:
После замораживания-размораживания общая выживаемость сперматозоидов составила 94,2% при жизнеспособности 70%, прогрессивной подвижности 20,7% и подвижности 36,2%. Прогрессивная подвижность, подвижность, жизнеспособность и выживаемость сперматозоидов в отмытой сперме были ниже, чем в нативной, со значительной разницей (P <0,01) как по показателям жизнеспособности, так и по показателям подвижности. Кроме того, уровень жизнеспособности был значительно выше в группе чашек PICSI, чем в группе чашек ICSI (P <0,01), а показатели подвижности, выживаемости и прогрессивной подвижности существенно не различались между двумя группами (P> 0,05).

Выводы:
Устройство SpermVD – одно из эффективных для замораживания малого числа человеческих сперматозоидов, а использование чашки PICSI для отбора зрелых сперматозоидов в нативной сперме может улучшить их качество после размораживания. Центрифугирование в градиенте плотности или определенные методы подготовки спермы перед замораживанием могут не понадобиться.

Ключевые слова:
Малое число сперматозоидов; центрифугирование в градиенте плотности; чашка PICSI; устройство SpermVD; витрификация.

PubMed: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31234060/
Full text: https://www.ejog.org/article/S0301-2115(19)30310-0/fulltext

Абстракт

Введение
Чтобы избежать повторных операций на яичках, мужчинам, страдающим азооспермией, может быть предложен эффективный и проверенный метод криоконсервации сперматозоидов, полученных с помощью microTESE, с последующей асинхронной ИКСИ. Витрификация сперматозоидов недавно использовалась в качестве альтернативы методам медленного замораживания, но до сих пор не проводилось проспективных рандомизированных исследований с сиблинговыми ооцитами для сравнения этих методов.

Заключение
Эти предварительные результаты должны быть подтверждены большим исследованием с возможным фокусом на случаях необструктивной азооспермии, когда количество сперматозоидов невелико, часто рекомендуется синхронная процедура и где SpermVD может стать удобным устройством для асинхронного планирования microTESE. Устройство SpermVD – эффективный и безопасный носитель и кажется подходящим для асинхронного сохранения небольшого количества сперматозоидов, что позволяет планировать асинхронную микро-TESE перед извлечением ооцитов и быстро выполнять отсроченную процедуру ИКСИ.

Poster presentation - ESHRE 2019 (Vienna)  - оставить ссылку

Абстракт

Рукопись Berkovitz et al. (1) вновь открывает дискуссию по редкому, но важному вопросу экстракорпорального оплодотворения, который касается криоконсервации очень малого количества сперматозоидов из эякулята или извлеченных хирургическим путем.

Для небольшого, но немаловажного процента бесплодных пациентов программа криоконсервации нескольких сперматозоидов может быть эффективной потому что:

(I) может предотвратить выполнение повторных биопсий яичек у пациента с азооспермией;
(II) может ограничить риск отсутствия спермы в день экстракорпорального оплодотворения;
(III) устраняет проблемы, связанные с координацией получения яйцеклеток с хирургическим извлечением сперматозоидов.

По этим причинам с течением времени было предложено несколько технических стратегий с целью криоконсервации сперматозоидов с хорошей выживаемостью и потенциалом к оплодотворению после размораживания, при этом с минимальной потерей сперматозоидов [см. Таблицу 1 и обзор (13)].

Однако из-за ограниченной эффективности и различных недостатков ни один из этих методов не был выбран подавляющей частью лабораторий.

Возможными ограничениями распространения этих стратегий могут быть технические трудности, чрезмерные затраты и время, нестандартные результаты, ограниченный спрос в клинической практике. По этой причине научное сообщество приветствует новые подходы к криоконсервации.

PubMed: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31032298/
Full text: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6462587/

Абстракт

Вопрос исследования:
Эффективно ли новое устройство витрификации сперматозоидов (SpermVD) при замораживании небольшого количества сперматозоидов мужчин, страдающих необструктивной азооспермией?

Краткое резюме:
Новый SpermVD – это эффективный и простой носитель для замораживания малого числа сперматозоидов в каплях небольшого объема. Он способствует сокращению времени поиска после размораживания с нескольких часов до минут, обеспечивая 96% выживаемость и последующее успешное использование сперматозоидов для оплодотворения.

История вопроса:
Было предложено немало методов криоконсервации единичных сперматозоидов для поиска решения в случаях тяжелого мужского бесплодия (например, мини-соломины, пипетки для ИКСИ, альгинатные шарики, криопетли). Однако каждый из них имел недостатки, которые препятствовали широкому использованию в основном из-за трудоемких процедур подготовки и извлечения сперматозоидов., а также того факта, что размороженные сперматозоиды не сразу доступны для микроманипуляций и требуют дополнительной обработки, что создает повышенный риск их повреждения.

Дизайн, размер, продолжительность исследования:
С использованием SpermVD было проведено проспективное когортное исследование циклов ИКСИ у мужчин, страдающих необструктивной азооспермией, в двух амбулаторных клиниках ЭКО по лечению бесплодия с 2015 по 2017 год.

Участники/материалы, постановка, методы:
У всех пациентов провели расширенный поиск эякулята до дня забора ооцитов, и все обнаруженные подвижные сперматозоиды перенесли в капли 0,8 мкл промывочной среды/криопротектора 1:1 на SpermVD, а затем погрузили в жидкий азот для криоконсервации. У пациентов с необструктивной азооспермией, которым была проведена хирургическая TESE, как подвижные, так и неподвижные сперматозоиды криоконсервировали с использованием SpermVD. В день извлечения ооцитов SpermVD размораживали, непосредственно переносили в планшет для ИКСИ, а полученные сперматозоиды использовали для процедуры ИКСИ.

Основные результаты и роль случая:
В проспективную когорту вошли 44 случая. Мы использовали SpermVD для витрификации 631 сперматозоида, из которых 540 (86%) были подвижными. Среднее количество замороженных сперматозоидов на одного пациента составило 14,3 ± 9,3. После размораживания извлекли 607 сперматозоидов, что обеспечило коэффициент восстановления 96%. Среднее количество размороженных сперматозоидов составило 13,8 ± 9,2. Восстановление 180 размороженных подвижных сперматозоидов составило 33% от всех замороженных подвижных сперматозоидов. Показатель оплодотворения составил 59%. После 44 процедур извлечения ооцитов были получены 24 (55%) клинические беременности. Частота родов (не считая трех текущих беременностей) составила 32%, а частота выкидышей – 29%.

Ограничения, поводы для осторожности:
Хотя SpermVD использовали в 44 случаях, более крупная когорта предоставит больше информации. Более того, криоконсервации подверглись только подвижные сперматозоиды из эякулята, что ограничивает знания об эффективности SpermVD для неподвижных сперматозоидов.

Более широкое значение результатов:
Новый SpermVD – простой эффективный носитель, который оптимизирует протокол замораживания небольшого количества сперматозоидов. Он создает возможность стандартного использования замороженных сперматозоидов после TESE для мужчин, страдающих необструктивной азооспермией, и, таким образом, помогает избежать повторных операций TESE. Кроме того, в случаях необструктивной азооспермии рутинная криоконсервация полученных сперматозоидов перед циклом ЭКО позволяет не бояться риска отмены цикла и, таким образом, уменьшить количество ненужных процедур извлечения ооцитов.

Финансирование исследования/конкурирующие интересы:
Внешнего финансирования не было. Нет никаких конкурирующих интересов.

PubMed: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30285105/
Full text: https://academic.oup.com/humrep/article/33/11/1975/5115483

Абстракт

Цель исследования:
Оценить результаты расширенного поиска сперматозоидов в эякуляте мужчин с виртуальной азооспермией для фертильности.

Дизайн:
Ретроспективная когорта из 242 пар, в которых партнер-мужчина страдал необструктивной азооспермией и которые проходили процедуру интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИКСИ).

Пациенты:
140 пациентов были направлены на расширенный поиск сперматозоидов в эякуляте, а 102 пациента были направлены на микрохирургическое извлечение сперматозоидов из яичек (microTESE).

Вмешательство:
Не было.

Основные показатели результата:
Были проанализированы и сопоставлены показатели забора спермы, оплодотворения и беременности, количество рожденных детей и замерших беременностей.

Полученные результаты:
В группе сперматозоидов, полученных из эякулята, подвижные были извлечены в 91 случае (65%) и в день забора ооцитов в 71 случае (78%) по сравнению с 70 случаями (68%) в группе microTESE с аналогичной частотой получения спермы между группами. Не обнаружили значительных различий между группами относительно среднего числа переносов эмбрионов и оплодотворения, а также частоты наступления беременности. Не было значительных различий между группами в отношении количества рожденных детей. Значительно более высокая частота замерших беременностей в первом триместре была обнаружена в группе сперматозоидов из эякулята (n = 14; 52%) по сравнению с группой microTESE (n = 3; 8,6%).

Вывод:
Проведение расширенного поиска сперматозоидов в эякуляте мужчин с виртуальной азооспермией может обеспечить частоту наступления беременности, аналогичную полученной при использовании microTESE, с более высокой частотой самопроизвольных абортов в группе сперматозоидов из эякулята.

Ключевые слова:
ИКСИ; виртуальная азооспермия; эякулированные сперматозоиды; интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов; коэффициент рождаемости; microTESE; частота беременности.

PubMed: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28483501/                                                                                                                                                  Full text: https://www.fertstert.org/article/S0015-0282(17)30309-6/fulltext